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噬菌体培养法

发表时间:2020-02-11 19:21

一. 液体培养法

1. 将指定之寄主细菌以液体培养法于适当温度下培养,一般培养16~24小时

2. 将噬菌体原液100 μl 与寄主细菌悬浮液300 μl均匀混合,静置15分钟使其感染。

3. 将混合液接至含10 ml新鲜液体培养基的试管中,于适当温度下振荡培养约8~24小时,培养时间依噬菌体之不同而异。

4. 将培养液移入离心管中,以10,000 rpm (5,000 g)离心10分钟,以沉淀寄主细菌。

5. 将上清液移至新管中,以0.22μm孔径之过滤器(filter)去除残余菌体,即得不含寄主细菌之噬菌体原液。但因噬菌体原液呈透明状,无法以肉眼直接判断其增殖效果,故应测定其效价以确认增殖培养之成效。

二. 双层琼脂培养法

1. 将指定之寄主细菌以液体培养法于适当温度下培养,一般培养16~24小时。

2. 将噬菌体原液100 μl 与寄主细菌悬浮液300 μl均匀混合,静置15分钟使其感染。

3. 将混合液加入5 ml 冷却至45℃的0.7﹪琼脂培养基中,均匀混合后立即平铺在已倒好的1.8﹪琼脂培养基平板上。

4. 待平板凝固后移至适当温度之培养箱中,一般培养8~24小时,培养时间依噬菌体之不同而异。

5. 以上述相同之步骤制作另一不含噬菌体之对照组。

6. 将培养好的平板与对照组比较其澄清度,一般含噬菌体之平板呈澄清状,而仅含寄主细菌之对照组则呈混浊状。

7. 将含有噬菌体之平板置于 -20℃下4~5小时后,取出置于室温下解冻。

8. 将解冻后产生的液体移入离心管中,以10,000 rpm (5,000 g)离心10分钟以沉淀寄主细菌。

9. 将上清液移至新管中,以0.22 μm孔径之过滤器(filter)去除残余菌体,即得不含寄主细菌之噬菌体原液。

三. 表面琼脂培养法

1. 将指定之寄主细菌以液体培养法于适当温度下培养,一般培养16~24小时。

2. 将寄主细菌悬浮液3 ml均匀平铺于1.8﹪琼脂培养基平板上,静置2小时。

3. 将余的寄主细菌悬浮液吸出,再将噬菌体原液0.3 ml均匀涂抹于平板上。

4. 于适当温度下培养约16~24小时,培养时间依噬菌体之不同而异。

5. 取5 ml 新鲜液体培养基加入平板中,以 L 形玻棒刮洗下平板表面之菌体。

6. 将刮洗下之液体移入离心管中,以10,000 rpm (5,000 g)离心10分钟以沉淀寄主细菌。

7. 将上清液移至新管中,以0.22 μm孔径之过滤器(filter)去除残余菌体,即得不含寄主细菌之噬菌体原液。


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